杀小鼠为什么要心脏灌注(心脏灌注小鼠)
杀小鼠为什么要心脏灌注(心脏灌注小鼠)
杀小鼠要心脏灌注的原因是研究心肌细胞凋亡及其调控机制。根据查询相关资料显示心脏灌注能更好的研究小鼠心肌细胞凋亡的情况。小鼠肝脏冰冻切片预处理，小鼠需要全身灌注冰冻切片是通过冷冻来获得硬度从而制成的切片，与石蜡切片不同的是，没有经过充分的脱水，对组织的观察会有一定的影响，冰冻的准确率是95%，而石蜡可以达到98%以上。
灌流固定小鼠时一般采用输液器的针头(4号半,这样肉眼可见就是肺部明显充气胀大变白,针头要从心轴方向进针,刺入心尖3~4毫米左右就可以了。
我们实验室鼠脑冰冻切片采用4%的多聚甲醛固定，小鼠直接灌注saline20ml，4%多聚甲醛20ml经左心室固定然后取材在4度4%多聚甲醛后固定4-6h，浸20%-30%糖沉底，就可以切片，切片首先需要冰冻切片机，我们的leica1900的，不知道lz那里有没有这个机子，还有一种原始的自己刷冻台的那种，比较麻烦，切片厚度大概选择20-40um差不多
开胸时要把肋骨提起，大U字剪开左右肋弓后掀起，血管钳固定一下（以免挡遮视野）；平头针插入后稍许打开输液器开关并迅速剪开充盈的右心耳（可见血涌出），用血管钳将心室和平头针一起钳夹固定再推（但滴速也不能太快以免血管被冲破，使灌流液流进肺里）。另：开胸时动作尽量要快；针头可以不插入主动脉，留置于左室也行。
试剂名称：4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠
所需药品及剂量：A液：多聚甲醛40g
蒸馏水400ml
B液：Na2HPO4·2H2O6.88g
蒸馏水300ml
C液：NaOH 3.86g
蒸馏水 200m
操作过程：A液最好在500ml的三角烧瓶中配制，至多聚甲醛完全溶解后冷却待用。注意，在溶解多聚甲醛时，要尽量避免吸入气体或溅入眼内。B液和C液配制好后，将B液倒入C液中，混合后再加入A液，以1n NaOH或1N HCl 将pH调至7.2～7.4，最后，补充蒸馏水至1000ml充分混合
应用范围：光镜和电镜免疫细胞化学研究，用于免疫电镜时，最好加入少量新鲜配制的戊二醛
保存期限及温度：4℃冰箱保存备用，长期保存
我最近就在做这个实验，是为了将血液排出，使灌注液充斥主循环。
啮齿动物固定的目的是为了快速且均匀地将组织保持于特定的生存状态。虽然将组织直接放置在固定液中可以很好地用于小块组织的固定。但是像完整大脑，心脏这样的较大样本会引起浸入式固定的问题，因为固定液并不会以相同的速率到达组织的所有区域，而组织往往在固定液进入前即发生缺氧反应。利用循环系统直接灌注固定液的优点是化学物质可以使用天然的血管网络系统快速到达生物体的各个角落以达到整体固定的效果。一种低成本，快速，可控和统一的固定方法，使用4％多聚甲醛通过血管系统灌注以获得大鼠大脑最好的固定。
（1）在手术之前，通过腹腔注射阿佛丁维持麻醉。
（2）一旦动物到达手术所需的麻醉程度，将其放在手术盘上。
（3）在肋骨下方的体表和腹壁做一个5-6厘米的侧切口。小心地将肝脏与隔膜分开。
（4）使用弯曲的钝剪刀在隔膜上做一个小切口，沿着肋骨的整个长度继续隔膜切口以暴露胸膜腔。
（5）沿着肋骨的一侧放置弯曲的钝剪刀，小心地移动肺部，并通过肋骨切割至锁骨。在对侧进行类似的切割。
（6）抬起胸骨，仔细修剪连接心脏的组织。用止血钳夹住胸骨尖端，将止血钳放在头上。
（7）将灌注针从心尖处扎入左心室，使用止血钳夹住心脏，可以固定针头并防止泄漏。
（8）使用剪刀在动物的右心房切开，以尽可能大的出口，而不会损坏降主动脉。此时动物即准备好灌注。
（9）灌注生理盐水至肝脏变白后换4%多聚甲醛毒继续灌注，完成灌注后，大鼠应为僵硬状态。
（10）解剖:利用剪刀取下头部从颈部到鼻子沿着体表做一个中线切口，露出颅骨。
（11）修剪剩下的颈部肌肉，露出颅底;使用剪刀或咬骨钳去除任何残留的肌肉。
（12）将一把剪刀的尖端放在一侧的枕骨大孔上，小心地沿着头骨的内表面滑动剪刀。
（13）切割延伸到后颅骨表面的远端边缘，在对侧进行相同的切割。使用咬骨钳清除小脑周围的头骨。
（14）当尖端从背侧远端后角移动到颅骨的远端前缘时，小心地沿着颅骨内表面滑动剪刀，在切割时注意防止损坏大脑。
（15）使用弯镊子将颅骨的背面剥离远离大脑。
（16）轻轻地将大脑从头部取出，并将其放入一瓶含有至少10倍于大脑本身体积的固定液中。
（17）将大脑置于4°C固定液中24小时并适时转动。
灌注效果： 灌注成功的最初指标是实验动物的四肢的颜色及僵硬度。大脑的大体检查显示血管无血液，在用于染色和组织切片中也是如此。灌注结果的最终指标是组织中超微结构的状况。
1 剪开胸腔，暴露心脏。
2 吊瓶里装入遇冷生理盐水，将输液针刺入左心室（心尖处），打开输液阀。
3 右心房上剪一小口，使血液和灌洗液可以排出。
4 灌入约50ml生理盐水后，观察从右心房流出的液体已经变成无色透明，说明血液已经冲洗干净。
5 不要从心脏上拔出输液针，换一个装有预冷过的4%多聚甲醛的吊瓶继续输液。当多聚甲醛输入体内时，小鼠会剧烈抽搐。
6 待抽搐停止后，再持续输5分钟，多聚甲醛即可将小鼠体内各脏器充分固定，牵拉四肢有僵硬感。此时已经固定完毕，可以取材。
